MIQEガイドライン(Minimum Information for Publication of Quantitative Real-Time PCR Experiments、略称:MIQE)は、定量リアルタイムPCR(qPCR)および逆転写qPCR(RT-qPCR)を用いる研究について、実験の設計、実施、解析および報告に必要な情報を示した指針である。実験結果の透明性、再現性および研究室間での比較可能性を高めることを目的として、2009年にStephen A. Bustinらによって提唱された。

2025年には、qPCR技術や解析手法の進展を反映した改訂版MIQE 2.0が公表された。

背景と目的 qPCRは核酸を高感度に検出・定量できる一方、試料の処理、核酸の品質、プライマーやプローブの設計、増幅条件、データ解析法など多数の要因によって結果が影響を受ける。2009年のMIQEガイドラインでは、論文中に実験条件の記載が十分でない場合、第三者が結果の妥当性を評価したり実験を再現したりすることが困難になることが問題として挙げられた。

MIQEは、qPCR実験を一律の手法で実施することを求めるものではなく、使用した試料、試薬、装置、実験条件および解析方法を十分に報告することによって、研究結果を第三者が評価・再現できるようにすることを目的としている。

2009年版 2009年版のMIQEでは、論文で報告すべき情報をチェックリストとして整理し、項目を「必須(essential)」と「望ましい(desirable)」に区分した。必須項目は原則として論文投稿時に提示し、望ましい項目についても利用可能な場合には報告することが推奨された。

主な報告項目には、以下が含まれる。

実験群および対照群を含む実験計画 試料の由来、処理方法および保存条件 DNA・RNAの抽出法、濃度および品質 逆転写を行う場合の反応条件 標的配列、プライマーおよびプローブの情報 qPCRの反応組成、装置およびサーマルサイクル条件 増幅特異性、増幅効率、検出限界およびダイナミックレンジ 陰性対照や非鋳型対照(NTC)の結果 生物学的反復および技術的反復 正規化方法、参照遺伝子の選択および統計解析法

また、用語の統一も提案され、定量リアルタイムPCRにはqPCR、逆転写を伴う場合にはRT-qPCRという略称を用いることが推奨された。蛍光シグナルが定量に用いられる水準に達するサイクルについては、装置メーカーによってCt(threshold cycle)、Cp(crossing point)など異なる名称が用いられていたことから、Cq(quantification cycle)という名称が提案された。

MIQE 2.0 2025年、Bustinらは2009年版以降のqPCR技術、試薬、装置および解析法の進展を反映したMIQE 2.0を公表した。

MIQE 2.0では、試料の取り扱い、アッセイの設計と検証、データ解析および品質管理に関する推奨事項が更新された。また、装置メーカーに対して解析済みの数値だけでなく生データを出力できるようにすることが推奨され、第三者による再解析や結果の検証を容易にすることが求められている。

データ解析については、Cq値そのものを最終的な定量値として扱うのではなく、PCRの増幅効率を考慮した標的量へ変換することが重視された。さらに、選択した定量法に応じて予測区間、検出限界およびダイナミックレンジを示すことや、適切な正規化および品質管理を行うことが推奨されている。

デジタルPCRとの関係 デジタルPCR(dPCR)については、qPCRを対象としたMIQEとは別に、2013年にdigital MIQE(dMIQE)ガイドラインが公表された。その後、装置、ソフトウェアおよびデータ解析法の進歩を反映して、2020年にdMIQE2020として改訂された。

脚注

関連項目 リアルタイムPCR 逆転写ポリメラーゼ連鎖反応 デジタルPCR 相対定量 絶対定量