Girolamo Colonna jako kardynałem był wpierw diakonem Sant’Agnese in Agone (tytuł nadany 28 lutego 1628), następnie diakonem Santa Maria in Cosmedin (27 czerwca 1639), Sant’Angelo in Pescheria (14 marca 1644) i Sant’Eustachio (12 grudnia 1644), następnie prezbiterem San Silvestro in Capite (23 września 1652), Santa Maria in Trastevere (9 czerwca 1653) i San Lorenzo in Lucina (21 kwietnia 1659), by wreszcie na koniec zostać kardynałem biskupem Frascati (21 listopada 1661). Od 1629 aż do śmierci Colonna sprawował urząd archiprezbitera bazyliki laterańskiej. W latach 1632–1645 był także arcybiskupem Bolonii, jednak zrezygnował z tego stanowiska i osiadł ponownie w Rzymie. Zasiadał w Kongregacji ds. Obrzędów, Kongregacji ds. Soboru Trydenckiego, Kongregacji ds. Ceremoniału, Kongregacji ds. Biskupów i Zakonników, Kongregacji Świętego Oficjum Inkwizycji oraz Trybunale Apostolskiej Sygnatury Łaski. Nadto był w Kurii Rzymskiej protektorem zakonu kartuzów.