Opisują one króla Adoni-Zedeka, który po zniszczeniu miasta Ajalon przez najeźdźców, poprosił króla Egiptu o przybycie z pomocą.
Księga Jozuego wymienia ją jako miejsce, w którym Jozue pokonał pięciu władców amoryckich Fragment według Biblii Tysiąclecia.. Po podboju Kanaanu, Hebrajczycy dokonali podziału ziemi pomiędzy Dwanaście Plemion Izraela. Starożytne miasto Ajalon przypadło plemieniu Dan Fragment według Biblii Tysiąclecia. i zostało wyznaczone jako jedno z miast przyznanych lewitom. Pomimo podboju Kanaanu, Izraelici byli nieustannie nękani najazdami Filistynów i z upływem czasu opuścili dolinę Ajalon, wycofując się w Góry Judzkie.
Dolina była miejscem wielkiego zwycięstwa króla Saula nad Filistynami Fragment według Biblii Tysiąclecia.. W późniejszych latach dolina była zamieszkana przez plemię Benjamina Fragment według Biblii Tysiąclecia.. Po podziale Królestwa Izraela, Ajalon stało się granicą pomiędzy Królestwem Judy a położonym na północy Królestwem Izraela. Pierwszy król judzki Roboam, wzmocnił fortyfikacje miasta Ajalon, zapewniając mu garnizon, broń i zapasy żywności Fragment według Biblii Tysiąclecia..
Krzyżowcy dobrze rozumieli znaczenie strategicznego położenia doliny i wybudowali tutaj zamek obronny.