Opis Postacie Akcja gry osadzona jest w fikcyjnym Azylu Arkham – położonym na wyspie Arkham u wybrzeży Gotham City szpitalu psychiatrycznym, w którym przetrzymywani są najgroźniejsi superzłoczyńcy. W grze pojawia się wiele postaci znanych z komiksów o Batmanie, a swoje role głosowe powtórzyło troje aktorów głosowych z serialu animowanego Batman. Kevin Conroy dubbinguje Batmana, Mark Hamill jego nemezis Jokera, z kolei Arleen Sorkin użycza głosu Harley Quinn, pomocniczce i dziewczynie Jokera. Batmanowi zdalnie pomagają Barbara „Wyrocznia” Gordon (Kimberly Brooks) i jej ojciec, komisarz policji James Gordon (Tom Kane).
Przemierzając Azyl, Batman musi zmierzyć się z kilkoma superprzestępcami: nienawidzącym go Bane’em (Fred Tatasciore), seryjnym zabójcą Victorem Zsaszem (Danny Jacobs), będącym metaczłowiekiem Zabójczym Krokiem (Steve Blum), kontrolującą rośliny Trujący Bluszcz (Tasia Valenza) oraz wywołującym koszmary Strachem na Wróble (Dino Andrade). Z Batmanem kontaktuje się również Człowiek-Zagadka (Wally Wingert), rzucający mu wyzwanie polegające na rozwiązaniu licznych zagadek, które ukrył na wyspie. Inne postacie spotykane przez bohatera to naczelnik Azylu Quincy Sharp (również dubbingowany przez Kane’a), rodzice Batmana – Thomas i Martha Wayne’owie (Conroy i Valenza) – oraz strażnik Aaron Cash (Duane R. Shepard sr).