Ołeksandrija PFK Sewastopol Prykarpattia Iwano-Frankiwsk Stal Ałczewsk Wołyń Łuck Zirka Kirowohrad Bastion Iljiczewsk Bukowyna Czerniowce CSKA Kijów Dnipro-75 Dniepropetrowsk Dynamo Chmielnicki FK Morszyn FK Połtawa FK Sumy Hirnyk Krzywy Róg Hirnyk-Sport Komsomolsk Jednist' Płysky Kremiń Krzemieńczuk MFK Mikołajów Nywa Winnica Olimpik Donieck Ołkom Melitopol Roś Biała Cerkiew Stal Dnieprodzierżyńsk Szachtar Swierdłowsk Tytan Armiańsk Tytan Donieck (został rozformowany) Weres Równe Irpiń Horenicze
Terminarz rozgrywek I runda wstępna (1/64) Mecze rozegrano 18 lipca 2009.
FK Morszyn+:- Olimpik Donieck MFK Mikołajów3:0 Ołkom Melitopol Weres Równe2:0 Hirnyk-Sport Komsomolsk Tytan Donieck-:+ Jedność Płysky Bastion Iljiczewsk2:1 Kremiń Krzemieńczuk Irpiń Horenicze+:-Професіональна футбольна ліга України Dynamo Chmielnicki FK Sumy2:1 Bukowyna Czerniowce Hirnyk Krzywy Róg2:2 Dnipro-75 Dniepropetrowsk k.3:1 Szachtar Swierdłowsk1:0 Roś Biała Cerkiew
II runda wstępna (1/32) Mecze rozegrano 5 sierpnia 2009 z wyjątkiem meczów Enerhetyk Bursztyn - Helios Charków oraz Bastion Iljiczewsk - Krymtepłycia Mołodiżne, które odbyli się 4 sierpnia.